OFERTA de ANALISIS de MUESTRAS

DETERMINACION de la DEAMINASA de ADENOSINA Y NUCLEOSIDO FOSFORILASA en GLOBULOS ROJOS y OTRAS CELULAS SANGUINEAS
Ultima revisión: 30 abril 1997

APLICACIONES (CLASIFICACION LAGID)

Diagnóstico de defecto molecular:

1.3 Deficiencia de la deaminasa de adenosina

1.4 Deficiencia de la nucleósido fosforilasa

Indicado en los siguientes fenotipos

1.2 Inmunodeficiencia combinada severa

1.2.1 Linfocitos T y B ausentes o muy bajos

1.2.2 Linfocitos T ausentes o bajos con linfocitos B normales

1.2.3 Linfocitos B y T normales o cercanos a lo normal

1.2.4 Sindrome de Omenn

1.3 Inmunodeficiencia combinada

1.4 Inmunodeficiencia celular con inmunoglobulinas y anticuerpos normales

Diagnóstico de herencia

Determinación de heterozigotos para deaminasa de adenosina y nucleósido fosforilasa en familiares de pacientes ya diagnosticados.

Otras indicaciones

Diagnóstico prenatal

Evaluación de reconstitución inmunológica

terapia enzimática con PEG-ADA

terapia génica

LABORATORIO QUE OFRECE REALIZAR el TEST

Michael Hershfield, M.D.
418 Sands Building
Research Drive
Duke University Medical Center
Durham, North Carolina 27710

Contactos
Dr. Michael Hershfield
Dr. Francisco Arredondo-Vega
Tecnólogo Stephan Toutain

Telefono: 919-684-4184/2622

Fax: 919-684-4168;

e-mail: msh@biochem.duke.edu

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DESCRIPCION de los EXAMENES OFRECIDOS

1. Determinación de la actividad de deaminasa y de la fosforilasa en globulos rojos lavados obtenidos con heparina o EDTA como anticoagulante. Cuando el paciente ha sido transfundido los resultados pueden ser equivocos y deben confirmarse con el método siguiente.

2. Determinación cuantitativa de nucleótidos de deoxiadenosina por cromatografía líquida de alta presion. Se realiza en globulos rojos lavados frescos, dentro de 24 horas, o en globulos rojos congelados. Permite el diagnóstico probable de deficiencia de adenosina pero no de la fosforilasa

3. Determinación cualitativa de nucleótidos de deoxiadenosina por cromatografía líquida de alta presion en gotas de sangre seca recibidas hasta una o dos semanas después de la obtencion de la muestra. Permite el diagnóstico probable cualitativo de deficiencia de adenosina pero no de la fosforilasa.

4. Determinación de la actividad de la deaminasa y de la fosforilasa en celulas mononucleares de sangre periférica libre de glóbulos rojos. Este método permite confirmar el diagnóstico definitivo de deficiencia de la deaminasa y de la fosforilasa. Para efectuar este test se requiere celulas mononucleares congeladas, o una muestra de 8 a 10 ml de sangre que se reciban dentra de 48 horas de la obtención de la muestra de sangre. En pacientes linfopénicos es a veces díficil obtener 0.5 milliones de células necesarias para el análisis. Fibrobastos cultivados (un frasco T25) también pueden usarse para esta determinación.

REQUISITOS DEL PACIENTE

Calificaciones necesarias

Cuadro clinico sugerente de una inmunodeficiencia combinada severa, o de las demás formas fenotípicas mencionadas. Las deficiencias de deaminasa y de la fosforilasa se presentan por igual en ambos sexos. Las inmunoglobulinas pueden ser normales, especialmente en la deficiencia de fosforilasa.

La mayoría de los pacientes con deficiencia de adenosina desarrollan síntomas en los primeros 6 meses de vida, pero un 20% puede presentar a los 3-5 años de vida. Ocasionalmente pueden presentar después de la primera decada d la vida. El hallazgo de laboratorio mas importante de la deficiencia de deaminasa es la linfopenia que afecta a linfocitos T y B. Las cifras absolutas de linfocitos estan bajo 1.000 cells/ml, y generalmente bajo 500 cells/ml.

La deficciencia de fosforilasa y rara y de presentación mas variable. Pueden pasar varios años antes de que se inicien las infecciones a repetición, que frequentemente son virales (Paraqinfluenza, virus respiratorio sincicial, enterovirus). Las cifras de linfocitos, inmunoglobulinas y pruebas funcionales de linfocitos pueden fluctuar en el tiempo. Las citopenias autoinmunes; trombocitopenia y anemia hemolítica, se observan en 1/3 a 1/2 de los pacientes. Algunos pacientes presentan anormalidades neurológicas. A diferencia de de las pacientes con deficiencia de la deaminasa, los pacientes con deficiencia de fosforilasa tienen niveles de ácido úrico sérico bajo (<1 m g/dL).

Causas de exclusión de una muestra

Serología VIH positiva

Transfusión reciente. Una transfusión aumenta la acitividad de la deaminasa en los glóbulos rojos y tambien puede corregir los niveles de acido urico en la deficiencia de fosforilasa.

En todo caso debe indicarse si el paciente recibió una transfusión, pues la presencia de cantidades bajas de celulas transfundidas pueden impedir que se haga el dianóstico correcto.

CARACTERISTICAS de la MUESTRA

Existen tres opciones para el envió de muestras.

1. Glóbulos rojos obtenidos en heparina, lavados, compactados y congelados a menos 20 -70°C, enviados en hielo seco. Después de la centrigugacion debe removerse el liquido sobrenadante en la forma mas completa posible. Permite almacenar la muestra congelada antes de su envío.

2. Sangre no congelada obtenida en heparina o EDTA, enviada el dia de la obtención de la muestra por correo expreso a temperatura ambiente o con "ice pack" para mantener la temperatura baja, pero sin congelar la muestra. El ideal es recibir la muestra dentro de 24 horas, pero la actividad enzimática de la adenosina se puede analizar si se recibe dentro de 72 horas.

El análisis por cromatografía de alta presión de metabolitos (nucleótidos), que se acumulan por la falta de la enzima no es posible despues de 24 horas. Este método se usa especialmente cuando hay dudas por haberse transfundido previamente al paciente.

3. Gotas de sangre seca. Para ello se aplican en triplicado sangre heparinizada o en EDTA a tarjetas usadas para enviar muestras para análisis de PKU. Cada uno de los tres círculos se prepara aplicando la muestra de sangre con una pipeta Eppendorf al centro del círculo hasta que se depositan 50 microlitros. No debe permitirse que la sangre se seque antes de aplicar el total de la muestra. Esta se deja secar al aire y la tarjeta se puede enviar por correo corriente o correo especial.

La muestra se puede analizar hasta dos semanas despues de obtenida. Se puede medir actividad enzimática y también metabolitos por cromatografía de alta presíon en estas muestras.

Es muy importante mandar una tarjeta de sangre normal como control junto con la muestra del paciente!

LOGISTICA del ENVIO de MUESTRA

Identifique claramente la muestra

Envíe calculando que llegue de lunes a viernes en la mañana

Si se envía por correo especial, siga las instrucciones para envio de muestras a los Estados Unidos que se publicaron en este boletín (Boletín-LAGID 1, 1997)

Glóbulos rojos congelados compactados. Colocar el tubo en una bolsa plástica, y enviar la muestra en hielo seco. 5 o mas kilos son necesarios para envios internacionales. Asegurese de cerrar y sellar bien la caja.

Tarjetas con sangre seca. En lo posible, enviar en sobres especiales "glassine", pero sobre corrientes también son aceptables.

Para cada muestra, incluir la ficha LAGID de información sobre el paciente, sin olvidar incluir la dirección a la cual comunicar los resultados por teléfono, fax o correo electrónico. Bajo comentarios, indique si el paciente recibió una transfusión dentro de los últimos dos meses, especificando las fechas delas transfusiones.

RESULTADOS

Tanto los valores obtenidos como su interpretación serán enviados a su dirección a la brevedad posible.

COMENTARIO

La ejecución de estos exámenes, que se efectuan a título de investigación, no se cobra. Este laboratorio no es un laboratorio clínico. Los datos obtenidos no serán publicados sin el consentimiento del médico que envía la muestra, y sin el consentimiento de la familia del paciente (que en caso de necesidad debe ser obtenido por el médico que envia la muestra). La coautoria en posibles publicaciones sera discutida durante la preparación de los manuscritos pertinentes, tanto por parte del médico que envia la muestra (publicación de caso clínico) como por parte del laboratorio que efectuó el examen (pubicación de nuevas mutaciones, de series de pacientes, etc).

Nuestra meta es ofrecer ayuda para efectuar diagnósticos oportunos y confiables de estas deficiencias enzimáticas para permitir la iniciación de un tratamiento adecuado en la forma mas rápida posible.

En pacientes diagnosticados con una deficiencia enzimática, ofreceremos mas detalles sobre otros estudios que serían interesantes de realizar en cada caso, incluyendo el diagnóstico de la mutacion causante de la deficiencia.